實(shí)驗(yàn)粗蛋白測(cè)定儀對(duì)飼料中粗蛋白的測(cè)定
隨著飼料工業(yè)的快速發(fā)展,飼料產(chǎn)量迅速增長(zhǎng),飼料中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定顯得日益重要,雖然粗蛋白測(cè)定無(wú)法鑒別三聚氰胺和尿素等物質(zhì),但是在目前條件下,飼料中粗蛋白的測(cè)定仍然是評(píng)價(jià)飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)。飼料中蛋白質(zhì)的含量是評(píng)價(jià)其質(zhì)量高低的主要指標(biāo)。因此,蛋白質(zhì)的測(cè)定一直是我們國(guó)家商品檢驗(yàn)中十分重要的項(xiàng)目。
幾年來(lái),隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,一些不法商販常在食品和飼料中摻假作偽,謀取暴利。所以,如何準(zhǔn)確快速測(cè)定其中的成分,已成為各監(jiān)督行業(yè)執(zhí)法的重要依據(jù)。飼料中粗蛋白的測(cè)定大致分為兩種:凱氏定氮法和自動(dòng)定氮儀法。自動(dòng)定氮儀法中要用到的粗蛋白測(cè)定儀是利用凱氏定氮原理,快速自動(dòng)地進(jìn)行蒸餾、滴定和計(jì)算。
實(shí)驗(yàn)用粗蛋白測(cè)定儀對(duì)飼料中粗蛋白的測(cè)定如下：
1、實(shí)驗(yàn)原理：凱氏法測(cè)定試樣中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機(jī)物，使含氮物轉(zhuǎn)化成硫酸銨。加入強(qiáng)堿進(jìn)行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測(cè)出氮含量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)6.25，計(jì)算出粗蛋白含量。
2、試劑：硫酸、混合催化劑、氫氧化鈉、硼酸、混合指示劑、鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、 蔗糖、硫酸銨、硼酸吸收液。
3、儀器設(shè)備：粗蛋白測(cè)定儀、樣品粉碎機(jī)或研缽、分樣篩、分析天平、消煮爐或電爐、滴定管、凱氏燒瓶、凱氏蒸餾裝置、錐形瓶、容量瓶、消煮管。
4、試樣的選取和制備：選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g，粉碎后全部通過(guò)40目篩，裝于密封容器中，防止試樣成分的變化。
5、分析步驟
（1）試樣的消煮：稱取試樣0.5～1g（含氮量5～80mg）準(zhǔn)確至0.0002g，放入凱氏燒瓶中，加入6.4g混合催化劑，與試樣混合均勻，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，將 凱氏燒瓶置于電爐上加熱，開(kāi)始小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強(qiáng)火力 （360～410℃）直至呈透明的藍(lán)綠色，然后再繼續(xù)加熱，至少2h。
（2）氨的蒸餾：將試樣消煮液冷卻，加入20mL蒸餾水，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，冷卻后用水稀釋至刻度，搖勻，做為試樣分解液。將半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示劑的錐形瓶?jī)?nèi)。蒸汽發(fā)生器 的水中應(yīng)加入甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，在蒸餾過(guò)程中保持此液為橙紅色，否則需補(bǔ)加硫酸。準(zhǔn)確移取試樣分解液10～20mL注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣。蒸餾4min降下錐形瓶使冷凝管末端離開(kāi)吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶?jī)?nèi)，然后停止蒸餾。
（3）蒸餾步驟的檢驗(yàn)：精確稱取0.2g硫酸銨，代替試樣，按（2）步驟進(jìn)行操作，測(cè)得硫酸銨含氮量為21.19±0.2％，否則應(yīng)檢查加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確。
（4）滴定：用（2）或（3）法蒸餾后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由藍(lán)綠色變成灰紅色為終點(diǎn)。
6 、空白測(cè)定：稱取蔗糖0.5g，代替試樣，按第5章進(jìn)行空白測(cè)定，消耗0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積不得超過(guò)0.2mL。消耗0.02mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積不得超過(guò)0.3mL。
7、 分析結(jié)果的表述
計(jì)算見(jiàn)下式：
粗蛋白質(zhì)（％）=（V2-V1）?c×0.0140×6.25/（m×V＇/V） ×100
式中：V2── 滴定試樣時(shí)所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積，mL；
V1── 滴定空白時(shí)所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積，mL；
c── 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L；
m── 試樣質(zhì)量，g；
V── 試樣分解液總體積，mL；
V── 試樣分解液蒸餾用體積，mL；
0.0140── 與1.00mL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液〔c（HCl）=1.000mol/L〕相當(dāng)?shù)摹⒁钥吮硎镜牡馁|(zhì)量。
6.25── 氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)。
重復(fù)性
每個(gè)試樣取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。
當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在25％以上時(shí)，允許相對(duì)偏差為1％。
當(dāng)粗蛋白含量在10％～25％之間時(shí)，允許相對(duì)偏差為2％。
當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在10％以下時(shí)，允許相對(duì)偏差為3％。
